雞傳染性法氏囊病毒抗體(IBDV Ab)試劑盒(ELISA)檢測說明書
原理:
試劑盒采用間接法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被雞傳染性法氏囊病毒抗體(IBDV Ab)捕獲抗原的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雞傳染性法氏囊病毒抗體(IBDV Ab)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
檢測范圍:6.25 ng/mL~ 200 ng/mL。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水