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免費代測植物甜菜堿脫氫酶ELISA試劑盒操作原理-夾心法

更新時間：2018-11-05      瀏覽次數(shù)：2157

免費代測植物甜菜堿脫氫酶ELISA試劑盒操作原理-夾心法

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被植物甜菜堿脫氫酶（BD）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物甜菜堿脫氫酶（BD）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

需要而未提供的試劑和器材

  • 酶標儀（450nm）
  • 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  • 37℃恒溫箱
  • 蒸餾水或去離子水

 

植物甜菜堿脫氫酶ELISA試劑盒操作步驟：

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.   設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
  3.   樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
  4.   除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

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